Diabetologia：激活但功能受到破坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身抗质到用到1M-哮喘外科患者的成果不下在儿童时期就有比较好的描绘，多个胰脏自身抗质乙M-肝炎的儿童早先有70%在毒素转换成后10年内入院哮喘，而随访15年的儿童这一比重减小到84%。来得之下，占外科1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的发病机制还并未获取充分的研究工作。

更加多的人开始采用分期系统来定义1M-哮喘的成果：个质在用到多种胰脏自身抗质时转回第1过渡阶段，用到血糖异常时转回第2过渡阶段，用到患者时转回第3过渡阶段。一些多发胰脏自身抗质乙M-肝炎的个质，在1期和2期，成果较慢，并发展为发病的1M-哮喘。我们早先描绘了一两组在首次检测到多种胰脏自身抗质结果显示后据估计10年无哮喘的快得多成果者，这两组高血压人数少，但外观上并不明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞膜反不应在成果较慢的高血压早先基本不普遍存在，但在全面性发病和长期普遍存在的哮喘高血压早先很容易检测到。这可能暗示，与成果高血压来得，这些高血压血栓反不应的调节进一步提高。

早期研究工作暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)比例正常，但哮喘高血压普遍存在一些机制缺陷，其早先除此以外对IL-2的反不应能力也降低。此外，哮喘高血压早先的效不应CD4+T细胞膜可能对调节更具抵抗性，展现出为效不应T细胞膜的抑制作用弱化，自然消除的Treg和质外消除的作用于Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞膜早先IL-2反不应弱化。本研究工作的目的是描绘了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极较慢成果者早先的外观上，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以年轻人为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的高血压三子女早先健康检查1M-哮喘的致命主因。我们早先描绘了长期较慢成果者的外观上，他们保持一致多重胰脏自身抗质乙M-肝炎超过10年，但并未用到哮喘的外科患者，慢性或非顺利进行性血栓。随后，10名继续保持一致无哮喘并愿意提供大量血液结果显示的较慢成果者设为T和B细胞膜机制比对。在目前的研究工作早先，8名慢成果者(SP两组)，早先位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身抗质乙M-肝炎。所有的大多数人都位处1M-哮喘成果的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗质对某些抗体的乙M-肝炎反不应，然而，一名高血压已经位处2期据估计6年，但并未用到外科患者，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在建模早先对该供质顺利进行了另行高风险评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，引入多给定流式细胞膜忍术和T细胞膜抑制作用试验高风险评估供质早先Treg的频带、遗传和机制。采用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)顺利进行无监督聚类比对，高风险评估Treg遗传。

结果：与卫生供质来得，来自慢成果质的潜意识CD4+T细胞膜的监督聚类结果显示，应答的潜意识CD4+ Treg频带减小，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c升高的高血压与成果较慢者和冗余的解读两组来得，Treg谱有所不同。机制比对暗示，与卫生供质来得，来自较慢成果质的Treg细胞内的CD4+效不应T细胞膜抑制作用明显受损。展现出为对效不应CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的抑制作用减小。

三幅1 全面性的遗传比对结果显示，CD4+Treg亚M-在慢成果路由表早先减小。由FlowSOM转化成的Treg室，周围在来自所有供质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物隐含深入研究出10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;新线程Treg_1;新线程Treg_2;新线程Treg_3;和新线程Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在节点两组周围上色。每个节点早先的饼三幅说明单个上面的隐含层级。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整质上面隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的沙质。(e-l)比起丰度为每个metacluster装有1](丰度> 0.05%)确切为HD和SP两组:新线程Treg_2 (e),新线程Treg_3 (f),新线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。紫色白点值得一提的是这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模M-证实，Treg频带的减小是成果较慢的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘比对(g-k)非常SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行分离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及供质SP 606(紫色)早先CD25+ cd127的频带综合三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型三空集的装有1];(c) HLA-DRloGITR−(新线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(新线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(新线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+新线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，左下角突出的簇被辨别为SP和HD路由表错综复杂的不同。(j)装有1]结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组早先，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比起丰度(比重)。(k)直方三幅结果显示每个簇的遗传(粉红色)和Treg上面比起隐含与故事情节隐含(深蓝色);上列，新线程Treg_3;下面一行，新线程Treg_4。故事情节与所有其他簇早先上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检验

三幅3 与卫生献血者来得，成果较慢者潜意识treg的GITR减小。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;新线程Treg_2;新线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含上面的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的隐含热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇早先所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方三幅(c)和综合三幅(d)。Wilcoxon类推符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供质除此以外，p< 0.05(深蓝色)供质SP 606和冗余的HD不除此以外在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR隐含，从分级依赖型，从所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)串联，结果显示直方三幅(e)和综合三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩检验

三幅4 来自较慢成果的CD4+ treg细胞膜管控效不应CD4+T细胞膜的能力也降低。SP两组用深蓝色的新线和白点说明，HD两组用金色的新线和白点说明，紫色的新线/白点说明供质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(不应答者)被上面为CFSE, Treg按辨别的比重滴定。用抗CD3 /28微珠应答细胞膜，培训3在此之后顺利进行流式细胞膜忍术检测。(a-d)与CD4+不应答者比起不应的treg培训(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不应答者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。采用乙M-肝炎解读(应答的响不应细胞膜包含treg)数值抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

三幅5 效不应CD4+T细胞膜对较慢成果的T细胞膜应答的抑制作用更脆弱。SP两组用深蓝色的新线和白点说明，HD两组用金色的新线和白点说明，紫色的新线/白点说明供质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(不应答者)被cfsel上面，treg按辨别的比重滴定。用抗CD3 /28微珠应答细胞膜，培训3在此之后顺利进行流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606不应答者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百份(b)。(c,d) CD25抑制作用百份(c)和CD134抑制作用百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训早先的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们得出的结论是，来自较慢成果三子的应答潜意识CD4+Treg在GITR隐含早先获取了适配和丰富，突显了进一步研究工作Treg在1M-哮喘高风险个质早先的表征的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28