Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中渐渐扩展

从第一次注意到家兔免疫球酶到注意到1M-白血病医学副作用的方面率在孩童时期就有很好的叙述，多个家兔免疫球酶中性的孩童当中有70%在血清转换后10年内入院白血病，而随访15年的孩童这一%-减少到84%。相比之下，占医学1M-白血病一半以上的M-1M-白血病的复发功用还从未想得到充分的研究课题。

更为多的人开始用于分期系统来定义1M-白血病的方面：个基底在注意到多种家兔免疫球酶时带入第1阶段，注意到血糖异常时带入第2阶段，注意到副作用时带入第3阶段。一些多发家兔免疫球酶中性的个基底，在1期和2期，方面较慢，并发展为复发的1M-白血病。我们在此之后叙述了一两组在首次监测到多种家兔免疫球酶样本后据估计10年无白血病的却是慢方面者，这两组病人人数少，但形态相当清楚。随后，我们发现家兔自身肝细胞依赖性CD8+T巨噬细胞底物在方面加速的病人当中基本不普遍存在，但在近期复发和长期普遍存在的白血病病人当中很容易监测到。这可能会证明，与方面病人相比，这些病人免疫底物的调节增强。

早期研究课题证明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)存量正常，但白血病病人普遍存在一些功用缺陷，其当中都有对IL-2的底物灵活性降低。此外，白血病病人当中的不稳定性该CD4+T巨噬细胞可能会对调节更具抵抗性，发挥为不稳定性该T巨噬细胞的选择性减弱，自然地显现出的Treg和人基底内显现出的作用于Treg，以及肝细胞经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2底物减弱。本研究课题的目的是叙述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在这群人却是加速方面者当中的形态，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁以下胃癌的病人直系亲属当中检查1M-白血病的危险因素。我们在此之后叙述了长期加速方面者的形态，他们保持多重家兔免疫球酶中性少于10年，但从未注意到白血病的医学副作用，慢性或非展开性免疫。随后，10名在此之后保持无白血病并不想共享大量血液样本的加速方面者纳入T和B巨噬细胞功用分析。在目前的研究课题当中，8名慢方面者(SP两组)，当中位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔免疫球酶中性。所有的行动者都处于1M-白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了家兔免疫球酶对某些肝细胞的中性底物，然而，一名病人已经处于2期据估计6年，但从未注意到医学副作用，一名病人被治疗为白血病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在建模当中对该小分叔父展开了直接审核。分立外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞选择性试验审核小分叔父当中Treg的高频率、表M-和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)展开无监理聚类分析，审核Treg表M-。

结果：与肥胖症小分叔父相比，来自慢方面基底的失忆CD4+T巨噬细胞的监理聚类标示出，选择性的失忆CD4+ Treg高频率减少，与阿托品作用于的TNFR相关酶(GITR)解读减少有关。一名HbA1c下降时的病人与方面加速者和意味着的比对两组相比，Treg谱有所各有不同。功用分析证明，与肥胖症小分叔父相比，来自加速方面基底的Treg介导的CD4+不稳定性该T巨噬细胞选择性显着毁坏。发挥为对不稳定性该CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的选择性减少。

所示1 深入的表M-分析标示出，CD4+Treg亚M-在慢方面函数调用当中减少。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有小分叔父的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物解读鉴定出10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用于9个各有不同Treg标明分解成的10个元簇的MST。每个结点都有一个协同(100个协同)，大得多的元协同(10个元协同)在结点两组区域内上色。每个结点当中的饼所示透露单个标明的解读分级。(b)每个元聚类的热所示，以标示出整基底标明解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说总质量为每个metacluster装入该线所示(总质量> 0.05%)清楚为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。粉红色圆圈都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模M-证实，Treg高频率的减少是方面加速的标志。分级门控(a - f)和棉花分析(g-k)更为SP行动者和意味着的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群基底的都有性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR解读展开分立，三维FlowSOM社会群基底。(b) HD(黑点)和SP(杂色)两组以及小分叔父SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的高频率汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装入该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风力著色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的各有不同。(j)装入该线所示标示出了在SP(杂色)和HD(灰点)两组当中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对来说总质量(%-)。(k)直方所示标示出每个簇的表M-(粉红色)和Treg标明相对来说解读与背景解读(粉红色);上列，内核Treg_3;下面偷偷地，内核Treg_4。背景与所有其他簇当中标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选

所示3 与肥胖症献血者相比，方面加速者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个解读标明的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热所示(sp606不都有在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读组合成，标示出直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon类推符号秩和筛选，p< 0.07(粉红色)所有小分叔父都有，p< 0.05(粉红色)小分叔父SP 606和意味着的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)组合成，标示出直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩筛选

所示4 来自加速方面的CD4+ treg巨噬细胞控制不稳定性该CD4+T巨噬细胞的灵活性降低。SP两组用粉红色的该线和圆圈透露，HD两组用金色的该线和圆圈透露，粉红色的该线/圆圈透露小分叔父sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标明为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养3紧接著展开流式巨噬细胞忍术监测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对来说应该的treg培养(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE选择性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性平均值。用于中性比对(选择性的积极响应该巨噬细胞不含treg)量度选择性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

所示5 不稳定性该CD4+T巨噬细胞对加速方面的T巨噬细胞活化的选择性更敏感。SP两组用粉红色的该线和圆圈透露，HD两组用金色的该线和圆圈透露，粉红色的该线/圆圈透露小分叔父sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标明，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养3紧接著展开流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬细胞因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE选择性花红(b)。(c,d) CD25选择性花红(c)和CD134选择性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

假设：我们得出的假设是，来自加速方面叔父的活化失忆CD4+Treg在GITR解读当中想得到了扩展和丰富，强调了全面性研究课题Treg在1M-白血病风险个基底当中的系统性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28